Fixateur : glutaraldéhyde 2.5%, paraformaldéhyde 1.5%, CaC12 0.5mM dans tampon caco 0. IM ou PBS O.IM, pH 7.2-7.4. Addition de fixateur directement sur les cellules en suspension et agitation horizontale. (24 heures à la T° pièce). Renouveler le fixateur avant la nuit. Le lendemain matin, renouveler le fixateur et poursuivre la fixation avec agitation horizontale à la T° de la pièce pour un autre 24 heures. Temps total de cette fixation : 48 heures.
Enlever le surnageant, ajouter 1 ou 2 gouttes d'agarose à 2%, resuspendre et centrifuger à chaud, 3-4 min.
Refroidir sur glace.
Couper le culot en morceaux minuscules et les placer dans le tampon caco O.1M.
Laver dans caco 0.1 M, 2×20 min.(minimum) à la T° pièce. On peut aussi les y laisser pour la nuit ou la fin de semaine à 4°C.
Post-fixation : Os04 1% dans caco O.1M, 90 min., à la T° pièce.
Lavage au caco O.1M, 3×10 min., à la T° pièce, ou la nuit ou la fin de semaine, à 4°C.
Déshydratation : alcool 30%, alcool 50%, alcool 70%, alcool 95%, alcool 100%, 10 min. chacun. Alcool 100%, 40 min., alcool 100% 10 min.
Effectuer 2 passages de 15 min chacun dans l'oxyde de propylène.
Mélange d'oxyde de propylène et d'épon (3:1) sans DMP, la nuit T° pièce.
Mélange d'oxyde de propylène et d'épon (1:1) sans DMP, la nuit T° pièce.
Mélange d'oxyde de propylène et d'épon (1:3) sans DMP, la nuit T° pièce.
Transférer dans de l'épon pur SANS DMP pour la journée.
Transférer dans de l'épon pur AVEC DMP pendant environ 5 heures.
Enrober.